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                  MGECs細胞

                  產(chǎn)品簡(jiǎn)介

                  MGECs細胞凍存時(shí)必須使用推薦的凍存培養基。凍存培養基中應含有 DMSO 或者甘油等冷凍保護劑。還可使用專(zhuān)門(mén)配制的凍存培養基。

                  更新時(shí)間:2024-03-26
                  訪(fǎng)問(wèn)次數:2957

                  產(chǎn)品分類(lèi)

                  PRODUCT CLASSIFICATION

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                  產(chǎn)品名稱(chēng):小鼠腎小球內皮細胞
                  英文簡(jiǎn)稱(chēng):MGECs細胞

                  貨號:LZ-X969980
                  規格:T25
                  生長(cháng)特性:貼壁

                  圖片2.jpg 

                  凍存培養基:
                  凍存細胞時(shí)必須使用推薦的凍存培養基。凍存培養基中應含有 DMSO 或者甘油等冷凍保護劑。還可使用專(zhuān)門(mén)配制的*凍存培養基。
                  1)細胞凍存培養基是一種用于哺乳動(dòng)物細胞的即用型*凍存培養基,其所含胎牛血清和牛血清比例經(jīng)過(guò)優(yōu)化,可改善細胞活力以及解凍后的細胞復蘇效果。 
                  2)凍存培養基是一種化學(xué)成分確定的、無(wú)蛋白、無(wú)菌凍存培養基,含10% DMSO,適用于多種干細胞和原代細胞 (黑色素細胞除外) 的凍存。
                  培養細胞凍存方案:
                  以下實(shí)驗方案介紹了培養細胞凍存的一般流程。詳細的實(shí)驗方案,必須參閱針對具體細胞的產(chǎn)品說(shuō)明書(shū)。 
                  1.配制凍存培養基,于2°C至8°C下儲存,直至使用。請注意使用何種凍存培養基取決于所用細胞系。
                  2.凍存貼壁細胞時(shí),利用傳代時(shí)所用方法輕柔地使細胞從組織培養容器上脫離下來(lái)。用該細胞所需*培養基重新懸浮細胞。
                  3.采用、細胞計數儀按照臺盼藍拒染法或者使用自動(dòng)細胞計數儀測定總細胞數和活細胞百分比。根據所需活細胞密度,計算凍存培養基需要量。
                  4.以大約100-200×g的離心力將細胞懸液離心5至10分鐘。在無(wú)菌條件下小心倒掉上清液,不要攪動(dòng)細胞沉淀。
                  注:離心速度和時(shí)間取決于細胞種類(lèi)。
                  5.用預冷的凍存培養基重新懸浮細胞沉淀,將其調整至該細胞適合的活細胞密度。
                  6.將細胞懸液分裝到若干凍存管中。分裝時(shí),應不時(shí)輕輕混合細胞,使其保持均勻的細胞懸液狀態(tài)。
                  7.使用可控制降溫速度的冷凍裝置冷凍細胞,使溫度每分鐘大約降低  1°C?;蛘?,將裝有細胞的凍存管放入凍存盒中,然后將凍存盒置于-80°C條件下過(guò)夜。

                  圖片2.jpg 

                  實(shí)驗材料: 
                  1. 50ml 配制好的RPMI1640培養液1瓶;8ml小牛血清(FCS) 1瓶;100ml 0.25%胰蛋白酶 1瓶;PBS(-)1 瓶 
                  2. 100ml滅菌燒杯2個(gè);
                  3、50ml離心筒2個(gè) 
                  4、滅菌培養皿1個(gè),細胞培養瓶1個(gè) 
                  5、1ml ,200μl移液器各1支;槍頭盒2個(gè);無(wú)菌玻璃攪拌棒1個(gè) 
                  6、細胞計數板1塊; 
                  7、滅好菌的鑷子1把,剪刀1把; 
                  8、酒精燈1臺;

                  實(shí)驗報告:
                  一、分離與培養:
                     1、無(wú)菌條件下,取出1-3d 齡SD大鼠心房組織,然后用PBS將此組織塊清洗2次,最后將組織剪成1mm3左右大??;
                     2、往組織塊中加入4 mL酶消化液(0.1% 胰酶和0.1% I型膠原酶),混懸10s,置37℃條件下消化10min,之后用滴管吹打制成單細胞懸液,自然沉淀并收集上清,用含10% FBS培養基終止消化后4℃放置;
                     3、剩下的組織再加入3~4mL酶消化液,混懸10s,置37℃消化10 min后,按上述方法收集上清并終止消化后4℃放置,重復此步驟2-3次,直至組織*被消化;
                     4、用200目不銹鋼篩網(wǎng)過(guò)濾細胞消化液,1200r/min 離心10min,棄去上清,沉淀細胞用含有10% FBS DMEM/F12培養基混懸,接種于25cm2培養瓶,放置于37℃ ,5%CO2 培養箱中培養;
                     5、差速貼壁1h后,吸出培養基,按實(shí)驗需要接種于6孔板中繼續培養;
                  二、免疫熒光鑒定:
                     1、待心房肌細胞生長(cháng)至80%融合時(shí),棄去培養基,用溫育的PBS沖洗細胞2次,每次10min,然后用4%多聚甲醛在室溫條件下固定細胞15min;
                     2、PBS沖洗細胞2次,每次10min,然后在4℃條件下,用0.1%Triton X-100透膜15min;
                     3、PBS沖洗細胞2次,每次10min,然后在室溫條件下,用4% BSA封閉細胞30min;
                     4、按1: 100的比例稀釋α-actin一抗,然后將其放在4℃冰箱中孵育細胞過(guò)夜;
                     5、PBS沖洗細胞3次,每次10min,按1:150的比例稀釋抗α-actin的二抗, 37℃條件下放置1h;
                     6、用PBS沖洗3次,每次10min,最后在倒置熒光顯微
                  鏡下觀(guān)察圖像并拍照。

                  Sorensen磷酸緩沖液(0.1mol/L,pH5.3-8.04)(-)-Epigallocatechin Gallate;表沒(méi)食子兒茶素沒(méi)食子酸酯縮酶(ADOLASE)活性比色法定量檢測試劑盒

                  Sorensen磷酸緩沖液(1×,pH6.2)(-)-Epigallocatechin Gallate;表沒(méi)食子兒茶素沒(méi)食子酸酯染色質(zhì)免疫沉淀分析(CHIP)試劑盒

                  Sorensen磷酸緩沖液(10×,pH6.2)Epimedin A;朝藿定A染色質(zhì)免疫沉淀分析(CHIP)*試劑盒(包括抗體)

                  TBS緩沖液(0.02mol/L,pH8.2)Epimedin A;朝藿定A人類(lèi)巨病蛋白酶(HCMV PROTEASE)活性熒光淬滅法定量檢測試劑盒

                  TBS緩沖液(0.05mol/L,pH7.4)Epimedin B;朝藿定B人體鼻?。╮hinovirus)定量PCR擴增檢測試劑盒

                  Tris-Maleate緩沖液(0.1mol/L,pH5.08-8.45)Epimedin B;朝藿定B人體鼻?。╮hinovirus)定性檢測試劑盒

                  Tris-Maleate緩沖液(1mol/L,pH5.0-8.5)Epmedin C;朝藿定C人體腺?。╝denovirus)定量PCR擴增檢測試劑盒

                  Tris-Maleate緩沖液(1mol/L,pH5.0-8.5)Epmedin C;朝藿定C人體腺?。╝denovirus)定性檢測試劑盒

                  阿拉伯膠水溶液(10%)Ezetimibe;依澤替米貝/依折麥布溶酶體形態(tài)染色試劑盒

                  阿拉伯膠水溶液(25%)Ezetimibe;依澤替米貝/依折麥布溶酶體型酸性磷酸酶總活性比色法定量檢測試劑盒

                  緩沖液(5×,pH7.4)Ezetimibe;依澤替米貝/依折麥布溶酶體脂酶(酸性脂酶)活性比色法定量檢測試劑盒

                  鈉緩沖液(pH7.4)Erythromycin;紅霉素溶酶體脂酶(酸性脂酶)活性染色試劑盒

                  鈉溶液(0.1mol/L)Erythromycin;紅霉素肉堿棕櫚酰轉移酶(CARNITINE PALMITOYL-TRANSFERASE)總活性比色法定量檢測試劑盒

                  鈉溶液(0.1mol/L)Erythromycin;紅霉素肉堿棕櫚酰轉移酶I(CARNITINE PALMITOYL-TRANSFERASE I)活性比色法定量檢測試劑盒

                  鈉緩沖液(0.1mol/L,pH8.6)Estradiol;β-雌二肉堿棕櫚酰轉移酶II(CARNITINE PALMITOYL-TRANSFERASE II)活性比色法定量檢測試劑盒
                  MGECs細胞XII B組磷脂酶A2(PLA2G12B)酶聯(lián)免疫吸附測定試劑盒Human A1BG(Alpha-1B-glycoprotein) ELISA Kit人瘤病16型E7抗體

                  髓系觸發(fā)受體-1(TREM-1)酶聯(lián)免疫吸附測定試劑盒Human SATB1 ELISA Kit人類(lèi)狀瘤病58 E6蛋白抗體

                  黑素轉鐵蛋白(MFI2)酶聯(lián)免疫吸附測定試劑盒Human SATB2(Special AT-rich sequence-binding protein 2) ELISA Kit人類(lèi)狀瘤病16抗體

                  抗酸性磷酸酶(ACP5)酶聯(lián)免疫吸附測定試劑盒Human SBDS ELISA Kit人類(lèi)狀瘤病18 E7抗體

                  甲狀腺原氨酸(Thyronine)酶聯(lián)免疫吸附測定試劑盒Human SA1 ELISA Kit人類(lèi)狀瘤病31 E7抗體

                  脂聯(lián)素(ADP/Acrp30)酶聯(lián)免疫吸附測定試劑盒Human SCAP ELISA Kit轉錄因子HES2抗體

                  集聚蛋白(AGRN)酶聯(lián)免疫吸附測定試劑盒 Human SAPS3 ELISA Kit轉錄因子HES3抗體
                  注意事項:
                       盡管經(jīng)測試Annexin V-FITC反復凍融5次對于其檢測效果無(wú)顯著(zhù)影響,但為取得良好的使用效果,3-6個(gè)月內推薦4℃保存,并適當注意避免反復凍融。
                       如果有細菌或真菌污染,會(huì )嚴重影響檢測效果。
                       染色后宜盡快檢測,時(shí)間過(guò)長(cháng)可能會(huì )導致凋亡或壞死細胞的數量增加。
                       如果細胞收集過(guò)程中使用了胰酶,需注意設法去除殘留的胰酶。殘留的胰酶會(huì )消化并降解Annexin V-FITC,導致染色失敗。
                       熒光物質(zhì)均易發(fā)生淬滅,在進(jìn)行熒光觀(guān)察時(shí),盡量縮短觀(guān)察時(shí)間,同時(shí)在操作和存放過(guò)程中也盡量注意避光保存。
                       用于流式細胞儀檢測時(shí),如果發(fā)現Annexin V-FITC單獨染色時(shí)出現了過(guò)多的PI假陽(yáng)性細胞,并且通過(guò)調整相關(guān)設置和參數也無(wú)法改善,可以用PBS將Annexin V-FITC稀釋3-10倍后再進(jìn)行檢測,這樣通??梢杂行p少假陽(yáng)性的壞死細胞。
                       需自備PBS。
                       本產(chǎn)品于專(zhuān)業(yè)人員的科學(xué)研究用,不得用于臨床診斷或治療,不得用于食品或藥品,不得存放于普通住宅內。
                       為了您的安全和健康,請穿實(shí)驗服并戴一次性手套操作。

                   

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